一、 苏木素
(1) Harris苏木素(退行性染色):
配方:
苏木素 1 g 无水乙醇 10 ml
蒸馏水 200 ml 硫酸铝钾 20g HgO 0.5 g
先将苏木素溶于无水乙醇中,备用。把硫酸铝钾(起媒染作用。
媒染剂:凡能与染料与组织结合,生成色淀,并促进染色的金属离子
盐类或金属原子的含氧酸)放入蒸馏水,加热溶解,再加入备用的苏
木素,煮沸 2 分钟,先加入少量的氧化汞,防止氧化过程中苏木素
外溢,玻棒搅拌,然后,边搅拌边加入氧化汞。加完后,立即移至冰
水中,加速其冷却,静置一夜后,过滤。用前以 5% 的比例加入冰醋
酸。如配好后时间较长,冰醋酸的量可适当多加一点。冰醋酸的量,
可直接影响苏木素的着色能力和清晰度。加少了,会造成核浆共染,
背景不干净;加多了,核着色能力下降。此液可放置3月至半年左
右,视气温而定。使用期要看染色的切片量来定:以每天100张片的
量,可使用半个月左右。
(2)Gill改良苏木素液(进行性染色):
苏木精 2 g 无水酒精 250 ml
硫酸铝 17.6 g 蒸馏水 750 ml
碘酸钠 0.2-0.3 g 冰醋酸 15-25 ml
先将苏木精溶于无水酒精,硫酸铝溶于蒸馏水,然后两液混合后加
入碘酸钠,最后加入冰醋酸。此液为半氧化进行性苏木素液,不会产
生沉淀,氧化膜少。常有人配制此液染不上色或染色较慢,可能是碘
酸钠量的原因,可根据气温变化多加一点(气温在30度时,一般碘酸
钠量为0.25 g,气温每降低5度,可增加0.01 g,反之可减少)。有
人用硫酸铝钾代替硫酸铝,也可以,着色能力略强于硫酸铝,染液会
产生沉淀和结晶。也可以采用加温溶解配制,可促进氧化,增强着色
能力。
Gill改良苏木素液色浅的原因与其苏木精、硫酸铝的量少也有
关,因此我们对配方略作改良:
苏木精 4 g 无水酒精 250 ml
硫酸铝 36g 蒸馏水 750 ml
碘酸钠 0.4 g 冰醋酸 15-25 ml
此配方需要分化。
二、伊红
(1)伊红(水溶性)
配方:
伊红 (水溶性) 2 .5 -5g
蒸馏水 500 ml
将水溶性伊红溶于蒸馏水中,然后加浓盐酸10毫升,充分搅拌,
静置过夜后过滤。过滤后的沉淀用蒸馏水冲洗二次,再过滤;将沉淀
物连同滤纸一起放入温箱内干燥,加95%酒精1000毫升,配成饱和
液。使用前再用95%的酒精 1:1~2倍稀释,加入1~2%冰醋酸(促染
剂:只能增加染料的着色能力,但不参与染色反应的物质)
此方法具有染色时间快,颜色鲜艳,不容易褪色,使用寿命长等
特点。
(2) 伊红(醇溶性)
配方:
伊红 (醇溶性) 2.5-5 g
95%酒精 1000 ml
加冰醋酸10滴(0.5ml),冰醋酸过多,可导致染浆时细胞核酸化。
伊红的染色速度,与其pH值相关,pH越酸,染色速度越快,pH在
3.5左右,染色时间只需2-3秒,当pH在6.5左右,染色时间要2-3分
钟。由于胞浆的等电点pH为4.7-5.0,故伊红pH以4.5左右为适。
我们在日常工作中1000 ml95%酒精中加0.8 g醇溶性伊红,机器
染色1000张切片左右(每天)更换,结果更稳定。
三、 固定液:
(1)12% 中性福尔马林液 (pH7.0)
甲醛 120 ml
NaH2PO4•H2O 4 g
Na2HPO4 13 g
蒸馏水 880 ml
(2)12% 酸性福尔马林液(PH 2.5-3.0)
甲醛 120 ml
水 830 ml
冰醋酸 30-50 ml
(3)12% 福尔马林液
甲醛 120 ml
水 880 ml
(4) Bouin 固定液
饱和苦味酸 85 ml
甲醛 10 ml
冰醋酸 5 ml
四、 脱钙液:
(1)10 % 盐酸甲醛脱钙液
浓盐酸 10 ml
甲醛 10 ml
水 80 ml
(2)30 % 盐酸脱钙液
浓盐酸 30 ml
水 70 ml
(3)10 % 硝酸脱钙液
浓硝酸 10 ml
水 90 ml
(4) Bouin 固定液
饱和苦味酸 85 ml
甲醛 10 ml
冰醋酸 5 ml
在众多脱钙液中,以硝酸为最强,在脱钙过程中,要经常用大头针对
骨组织进行针刺,如果能容易刺进了,就说明脱钙完成了,就应该立
即中止脱钙。较硬的骨组织应该用10 % 硝酸脱钙,一般4-24小时。
一般钙化或少量骨组织,可用30 % 盐酸脱钙,一般12-36小时。骨髓
组织可用10 % 盐酸脱钙,一般12-24小时。
脱钙结果后,必需流水冲洗4-8小时,才能再进行固定、脱水。
五、1% 盐酸酒精分化液:
浓盐酸 1 ml
75%酒精 99 ml
六、清洗液:
30%盐酸或者用5%苯酚水溶液浸泡24小时,取出后充分水洗。此法
可用于盖玻片或载玻片处理。
七、当量盐酸:
配制1N的HCL 1000 ml ,需浓HCL多少ml ?
M x 分子量 1 x 36.46
= ———————————— = —————————— = 82 .8 ml
化合价x 比重 x 百分浓度 1 x 1.19 x 37%